最近一直在做细胞实验，逛论坛发现很多人在细胞实验中经常遇到:细胞冷冻后很难恢复，或者恢复后出现大量死细胞。细胞的状态直接影响后续实验，以下来自细胞复合体
苏，细胞冻存和细胞超低温冰箱保存，三个方面分享我们实验室的方法。我不敢说权威，但我真的总结了我这些年的一些经验教训，供你参考:
细胞恢复
1)用75%的酒精擦拭洁净工作台，放置已灭菌的培养瓶和吸管，用紫外线照射20min；
2)从冰箱中取出冻存管，迅速放入预热好的37℃水浴锅中，不断摇动，使冻存管迅速融化；3)将冷冻溶液转移到装有4毫升细胞培养液的离心管中；4)将细胞悬浮液以1000rpm离心5分钟；分钟；5)吸取上清液，用1毫升培养液重悬细胞；6)向细胞培养瓶中加入4mL培养基，然后向培养瓶中接种1mL细胞悬液，轻轻搅拌，将培养瓶放入CO2培养箱中培养；7)在7)24小时内更换一次培养基并继续培养。
细胞冷冻保存
1)用75%的酒精擦拭洁净工作台，放置已灭菌的培养瓶和吸管，用紫外线照射20min；2)去除旧培养液，用PBS冲洗两次，在细胞培养瓶中加入600L胰蛋白酶，显微镜下观察细胞。如果细胞回缩，细胞间缝隙扩大，细胞开始变圆，则轻轻敲击细胞培养瓶，加入5mL培养液，停止消化；3)将细胞悬浮液转移到离心管中，并以1000rpm离心5分钟；4)离心细胞，弃去上清液，加入1.5mL预冷的细胞冻存液，混匀后移入冻存管，放入细胞程序冷却箱中。短期使用的电池可以保存在-80℃的冰箱中。
细胞冷冻保存在冰箱中
通过以上努力获得的细胞一定要小心保存，吐槽一下我们实验室经历过的惨痛教训:
存储分区和管理空
以前因为实验室人多，冰箱里每个人的存储空划分不合理，每个人的样本都乱放。冰箱门反复开关，搜样时间过长，直接导致冰箱内漏冷，细胞因温度不均反复冻融，细胞质量大打折扣。
解决方案1)建立相关程序和管理规则。
2)如果要更换实验中的冰箱，建议买更智能的。
我们在实验室里培养了几十种细胞。实验组5个人在保存冷冻细胞时，选择查询“* * *细胞”。所有访问位置一目了然。然后，打开冰箱门，直接找位置取放。一步到位，非常方便。
细胞复苏、冻存和保存一直是细胞实验中最基础的工作。很多时候后续实验出现问题，很大一部分原因就是这些基础工作不到位。根据自己的实验室条件，合理优化以上步骤和方法，相信以后你的细胞实验会更成功。
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