微生物中勺子的菌落总数怎么检测

1.1 固体和半固体样品:称取25g样品置盛有225mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,

8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式

均质器拍打1min~2min,制成1∶10的样品匀液。?

1.2 液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶

(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1∶10的样品匀液。?

1.3 用1mL 无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液

的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其

GB4789.2—2016

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混合均匀,制成1∶100的样品匀液。

1.4 按6.1.3 操作,制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1 次1 mL 无菌吸管或

吸头。

1.5 根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在

进行10倍递增稀释时,吸取1mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取

1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

1.6 及时将15mL~20mL冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱

中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。?

2 培养?

2.1 待琼脂凝固后,将平板翻转,36 ℃±1培养48h±2h。水产品30 ℃±1 ℃培养72h±3h。?

2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层

琼脂培养基(约4mL),凝固后翻转平板,按6.2.1条件进行培养。?

3 菌落计数?

3.1 可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以

菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表示。?

3.2 选取菌落数在30CFU~300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU

的平板记录具体菌落数,大于300CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的

平均数。?

3.3 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释

度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以

2,代表一个平板菌落数。?

3.4 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。

具体步骤你可以参考 GB 4789.2-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定

广东省微生物分析检测中心的检测业务介绍

水产品当水分活度下降到0.9时，虽然一部分细菌受到抑制，此时酵母和霉菌仍能旺盛地生长。水分活度下降到0.80-0.85时，一部分霉菌还会繁殖，食品还会在1-2周内腐败变质，此时霉菌就成了主要腐败菌。只有水分活度下降到0.75时，食品的腐败变质才显著减慢。若水分活度降至0.65时，能生长的微生物已为数极少，因而食品贮藏可达1-2年。一般认为，在室温下贮藏食品，水分活度应降低到0.70。在此水分活度下，一些霉菌如灰绿曲菌等仍会缓慢地生长，故干制水产品极易长霉，这时霉菌就成为干制品中最常见的腐败菌。三、水分活度在水产品保藏上的意义及展望水分活度与食品结构密切相关。两种食品的绝对水分可以相同，由于水分与食品结合的程度或它的游离程度不一定相同，水分活度也就不同。各种食品都有一定的Aw值，各种微生物和各种化学与生物化学反应也都有一定的Aw阈值。

这一点对我们估价食品的耐藏性有重要意义。如我们对烤鱼片、鱼糜干制品等方便食品要求水分控制在13%以下，是因为在此水分下，水分活度相当于0.70-0.75之间。这一水分活度一般细菌已很难存活，能生长的只有一些耐干燥霉菌，只要在加工、包装、运输过程中采取防霉措施，就能达到较长时间贮藏的目的。现在食品科技界正在探索按预定要求控制一些食品的Aw值以达到免杀菌保存食品的可能性。水分活度还能限制微生物毒素的产生。微生物产生毒素的最低Aw值，如肉毒梭菌为0.94-0.98；金**葡萄球菌为0.87-0.94；灰黄霉素为0.85；黄曲霉毒素为0.83等。

一、食品饮料、保健品检测

产品类型：

酱油、鸡精、醋及调味酱等调味品。

腊肉、腊肠、香肠等酱卤肉。

冰淇淋、冰棍、雪糕等冷冻饮品及饮料（果、蔬汁饮料、碳酸饮料、罐装茶饮料等。

糕点（饼干）、面包、蜜饯、糖果。

凉拌菜、酱腌菜、冷食菜及面筋、豆腐等豆制品。

啤酒、果酒、黄酒及葡萄酒等酒类。

膨化食品、淀粉类食品、油炸小食品、早餐谷物、方便面、速冻预包装面米食品等以粮谷、果蔬类为原料加工的食品。

多糖类（膳食纤维）、维生素类、蛋白质类、活菌类、微量元素类等保健（功能）食品。

鲜蛋、蛋白片及蛋黄粉等蛋制品。

酸奶、炼乳、奶（乳）粉及干酪等乳制品。

检测项目：

（1）微生物指标：

细菌总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、沙门氏菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌、副溶血性弧菌、金**葡萄球菌、溶血性链球菌、产气荚膜梭菌、蜡样芽孢杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌、霍乱弧菌、阪崎肠杆菌、空肠弯曲菌、铜绿假单胞菌、肠球菌、乳酸菌、双歧杆菌、嗜热菌芽孢（需氧芽孢总数、平酸芽孢和厌氧芽孢）、罐头食品商业检验等。

（2）理化指标：

维生素B12、叶酸、游离生物素含量（微生物法）检测；水分、灰分、蛋白质、脂肪、粗纤维、多糖、三萜类物质、虫草素、虫草酸、腺苷、氨基酸、水溶性维生素等；铅、砷、汞、镉等重金属；生物毒素测定、农药残留、兽药残留等。

二、水质检测

产品类型：

（1）生活饮用水、天然矿泉水、纯净水、山泉水和瓶（桶）装饮用水等。

（2）渔业用水、工农业生产用水和工业循环冷却水等。

（3）地表水、地下水、污水等环境水质。

检测项目：

（1）理化指标

pH、电导率、色度、浑浊度、臭和味、肉眼可见物、溶解性总固体，总硬度、悬浮物、化学需氧量、五日生化需氧量、高锰酸盐指数、总磷、总氮、铵（氨氮）、油、总有机碳（TOC）、苯胺类化合物、铁、硝酸盐、溴酸盐、溴化物，农药残留和兽药残留，以及砷、铅、汞、镉等重金属。

（2）微生物指标

菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌、乳酸菌、霉菌、酵母、产气荚膜梭菌、军团菌、粪链球菌、硫酸盐还原菌、亚硫酸盐还原性厌氧梭菌芽孢、粘泥真菌、粘液形成菌、沙门氏菌、志贺氏菌、金**葡萄球菌、溶血性链球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、铜绿假单胞菌、致病性嗜水气单胞菌、香港海鸥形菌、肠球菌、空肠弯曲菌、光合细菌等。

三、农产食品等检测

1、产品类型：

（1）农副产品

瓜果蔬菜、果干品、腌渍品、茶叶、谷物、坚果、豆制品、糖类、动植物油脂、水产品、鲜蛋、原料乳等。

（2）饲料、宠物食品。

（3）微生物制剂、酶制剂

各种微生态制剂、净水剂、光合菌剂、EM菌剂、各种酶制剂。

2、检测项目：

（1）理化指标

常规指标：水分、pH、有机质、粗蛋白、灰分、粗纤维等；

重金属和有毒有害物质：镉、铬、铅、砷、汞、亚硝酸盐、二氧化硫残留等；

酶活性：纤维素酶、蛋白酶等。

农药残留、抗生素残留、微量元素、维生素、18种氨基酸、核苷酸等。

（2）微生物指标

常规微生物：细菌总数、大肠菌群、霉菌、酵母等；

食源性致病菌：沙门氏菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌、副溶血性弧菌、金**葡萄球菌等；

有效活菌数：枯草芽孢杆菌、双歧杆菌、乳酸菌、酿酒酵母、光合细菌等。

四、空气检测

测试环境类型：

（1）生产车间（洁净生产厂房、无菌灌装车间等）

（2）洁净工作室（医院手术室、无菌操作室、无菌实验室等）

（3）公共场所（办公室、学校、餐厅、公共交通工具等）

（4）其他环境场所（垃圾处理厂、污水处理厂、工业废气等）

检测项目：

（1）空气洁净度（尘埃粒子、浮游菌、沉降菌、致病菌、风速等）测试和评估。

（2）空气微生物检验。

（3）生产环境消毒效果测试。

五、药品、一次性卫生用品（医疗用品）检测

产品类型：

（1）药品、药品原料、敷料、制药用水、无菌器具。

（2）一次性使用医疗用品（一次性注射器、输液器、护理用指套、灭菌棉签、手术衣、注射针、针炙针等）

检测项目：

（1）微生物限度检查、致病菌检测及方法验证。

（2）无菌检查及方法难证。

（3）初始污染菌检验及无菌检验

（4）细菌内毒素检查。

产品类型：

（1）个人清洁护理用品（洗手液、洗发液、沐浴液、洗面奶、润肤乳液、化妆品等）

（2）洗涤用品（洗衣粉、洗衣液、洗洁精、洗衣皂、衣物功能护理剂、衣物除菌液等）

（3）一次性使用卫生用品（卫生湿巾、纸巾、一次性手套、电话膜、口罩、帽子、内裤、尿布、妇女卫生用品、卫生棉等）

检测项目：

（1）微生物分析：常规微生物指标及致病菌检验（菌落总数、霉菌、酵母、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌、金**葡萄球菌、溶血性链球菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、军团菌等）

（2）理化指标：铅、砷、汞等重金属，甲醇、甲醛、黄曲霉毒素、纤维素酶、糖化酶、淀粉酶、蛋白酶、耐热淀粉酶、超氧化物歧化酶（SOD）。

（3）化妆品的鼠伤寒沙门氏菌/细菌回复突变试验、急性经口毒性试验、急性经皮毒性试验。

六、食品安全性评价、菌种鉴定

服务范围：

食品、饮料、饮用水企业

服务内容：

（1）食品中农药残留度、兽药残留度及重金属离子的分析评价。

（2）企业环境空气洁净度评价，背景微生物的分类鉴定。

（3）生产过程中微生物污染控制和饮用水溴酸盐问题的成套解决方案。

（4）实验室检测能力比对试验。

鉴定类别：

细菌、霉菌、酵母菌及放线菌等常见微生物种类及新菌种的鉴定。

鉴定方法：

（1）分子生物学鉴定：包括28S、18S、ITSrDNA等基因序列分析方法。

（2）Biolog微生物自动分析系统。

（3）生物梅里埃（API）微生物分析系统。

七、技术服务

1）为生产企业提供解决微生物污染控制的成套解决方案。

2）为生产企业提供标准咨询与培训服务。

3）为生产企业培养微生物检验技术人员。