常用的核酸染料有:
1、EB染料
EB属于核酸分子嵌入剂,通常用于分子遗传学、DNA和染色质结构分析等研究中,特别是国内很多实验室仍在使用EB进行凝胶核酸电泳实验的染色。
EB是极易渗透细胞膜与胞内DNA嵌合的小分子,它具有平面共轭大环结构,是典型的DNA分子插入试剂,菲啶环插入到DNA分子的碱基对之间,与DNA嵌合形成稳定的复合物,并影响DNA
的复制,破坏正常的遗传生理现象。EB作为诱变性的化合物,它在人体中诱导突变的机制是不可逆转的。
2、GoldView染料
GoldView(GV)是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,也可用于RNA染色。
实质上,所谓的Goldview就是吖啶橙,也就是传说中的AO,有一种传统的细胞凋亡试验,采用的染料正是吖啶橙,也就是AO/EB染色试验,EB无法穿透完整的细胞膜,而AO可以穿过细胞膜染上细胞核,以此来区分凋亡和未凋亡的细胞。
3、GelRed 和 GelGreen染料
GelRed
和GelGreen
是两种集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成任何环境污染。
GelRed
和 GelGreen
的特殊化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞,正是这一特性降低了染料的细胞毒性。不过也正是因为如此,其价格大约是GoldView的十倍左右。
扩展资料
核酸染料的科研应用:
1、免疫分析
荧光标记的单克隆抗体技术为流式细胞仪在研究细胞膜和细胞内各种功能性抗原、肿瘤基因蛋白等领域扩展了无限的应用空间。
荧光探针可以通过蛋白质交联剂共价结合在单克隆抗体上。免疫荧光标记最常用的染料有异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)、藻红蛋白(PE)以及AlexaFluor系列染料等。
2、核酸检测
核酸荧光染料对细胞核染色后定量测量细胞所发出的荧光强度,就可以确定细胞核中DNA、RNA的含量,并可以对细胞周期和细胞的增殖状况进行分析。
有多种荧光染料可以对细胞中的DNA或RNA染色,常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst 33342等,RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。
百度百科-荧光染料
将细胞分离的原理有哪些?各有什么特点
不全一样,基层医院一般用的是三分类血常规仪,价格相对较低,能满足一般需求,而县级医院一般使用的是五分类血常规仪,但一般不包括急性时相反应蛋白和网织红细胞参数,也不连接流式细胞仪,对异常细胞一般采用涂片镜检的方式检查,三甲医院一般采用五分类血常规仪,并且包括急性时相反应蛋白和网织红细胞参数,血常规仪一般连接了流式细胞仪,对异常细胞直接通过流式细胞仪得出明确结论,但价格也较昂贵。
将细胞分离的原理有机械法、化学法、酶消化法、酶消化法、流式细胞术。各有优点和缺点。
1、机械法:利用物理外力,如切、割、压、挤、拉、撕、旋等方法,将细胞分离开。优点:操作简单,不使用有毒和致癌物质。缺点:对于细胞脆弱的情况,会造成细胞损伤。
2、化学法:利用化学试剂溶解细胞间粘连物和细胞本身的粘附物,让细胞分离开。优点:分离效果好,易于扩大规模。缺点:化学试剂对细胞产生毒性和副作用。
3、酶消化法:用特定酶对细胞的胞膜和基质进行消化,使细胞释放出来。优点:可以选择特定的酶,在具有选择性的条件下将目标细胞分离出来。缺点:目标细胞因受到消化酶的损伤而死亡。
4、酶消化法:利用离心机对不同密度的细胞进行分离。优点:分离效果好,速度快。缺点:离心需要繁琐的操作,不能完全分离所需的细胞类型。
5、流式细胞术:利用流式细胞仪对细胞进行单个分选。优点:技术先进,可快速、准确的分离出目标细胞。缺点:设备价格昂贵,需要专业操作人员。
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