到
节真正的精华片段来了，我们要在这里帮助一个连体姐妹进行仪式，帮助他们超脱我们这样才可以获得她腰间的钥匙，在这一关当中依然延续了前几个章节当中的血腥画面，有不少个镜头让我感觉生理反胃，尤其是亲自去取青蛙先生肚子里面的东西的时候，还有将这两个姐妹送上天的时候还有打开镜子时，那一个恐怖的实验画面，给我留下非常深刻的印象。但是好在我们有猫猫先生的陪伴，我们在这一关当中就可以解救出在一开始就陪伴我们主角弗兰的小猫先生。
43.向左走下一个场景当中，点击窗子前面的桌上，之后返回上一个场景上楼。43.
44.上到二楼之后打开白色的桌子得到一个黑色的蜡烛，之后再将旁边的扫帚拿走。44.
45.向左走下一个场景当中，在桌上拿到一个镊子，返回刚刚拿到黑色蜡烛的房间，拉下机关，上到阁楼当中。45.
46.打开灯跟笼子当中的小猫进行对话。46.
47.下去下楼和连体姐妹进行对话，右走进行一个小高能，接着点击窗户，来到窗户外面点击模板。47.
48.之后点击青蛙进行对话，返回屋子内，吃药。这个时候就会来到一个泥沼的空间当中，点击木板上去，之后使用木板搭建，再使用小刀割断绳子。48.
49.吓到最下面点击掉落下来的瓶子，是用镊子打开瓶子，可以得到纸。49.
50.接着是用小刀割伤自己返回现实世界。50
5
54.使用劣质配放配合打字机，返回到可以出到窗外场景的地方就可以看到连体姐妹将我们所需的材料带回来了，这个时候进行对话。54.
55.返回之前连体姐妹喝茶的地方，使用劣质配方交给她们进行对话，就可以得到一个材料。
56.返回刚刚画法阵的地方，将双胞胎的头发放入到沸水当中，这一锅材料就做好了，返回告知连体姐妹。
57.来到法阵这里进行仪式，使用刚刚沸水煮成的药剂，这样连体姐妹就变成灰了，可以在地上捡到钥匙。5
58.来到之前找到镊子的房间当中点击镜子，使用钥匙打开镜子，这个小游戏是将所有的齿轮全部连在一起，才能将最后的机关进行转动，如视频所示。58.
59.镜子碎裂之后在里面拿到钥匙，上到阁楼使用要是解救猫咪。5
60.解救完猫咪之后下楼，点击窗户离开。之后点击青蛙进行对话。60.
61.对话完成之后使用发酵粉，青蛙就变大了。之后就可以顺利过河。
62.到了下一个场景当中一直向左走，触发剧情。
中
bowtie2有end-to-end和local两种比对模式。
两种模式的的预设参数如下，其中 end-to-end是默认比对模式
可以通过参数设置进行调节，比如选择 --very-sensitive-local 模式
bowtie2 --very-sensitive-local -x $REF -1 $R1 -2 $R2 > bowtie.sam
思路：从一个基因组中以一定错误率生成一定数量的reads，再用两个比对工具比对
结果bwa和bowtie2比对率差不多，分别是95.4%和94.7%。
但是 生成错误率为10%的reads进行比对，则差异很大。
bwa比对率为83.3%，而bowtie2只有28.9%。
通过调节为 --very-sensitive-local 模式，比对率上升至63.86%，进一步调节模式参数
time bowtie2 -D 20 -R 3 -N 1 -L 20 -x $REF -1 $R1 -2 $R2 > bowtie.sam
比对率上升至87.14%，可见在 测序质量不好时，比对结果和模式参数设置有很大关系。
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